Expi293F™ 細胞におけるルシフェラーゼ発現量の比較

Expi293F™ 細胞へ分泌型 Luc 発現ベクターを各種トランスフェクション試薬を用いて導入し、Expi293™ Expression Medium で培養した。培養スケールは 30mL で実施し、96 時間後に培養上清を回収後、ルシフェラーゼアッセイによって発光強度を測定した。

Expi293™、Freestyle™、 Expi293F™は、Thermo Fisher Scientific社の登録商標です。

Expi293F™ 細胞における IgG 産生量比較

Expi293F™細胞へH鎖、L鎖発現ベクターを各種トランスフェクション試薬を用いて導入し、Expi293™ Expression Mediumで培養した。培養スケールは30mLで実施し、120時間後に培養上清を一部回収した。回収した培養上清の電気泳動後にCBB染色にて発現量を比較した。

FreeStyle™ 293-F細胞におけるルシフェラーゼ発現量の比較

FreeStyle™ 293-F細胞へ分泌型Luc発現ベクターを各種トランスフェクション試薬を用いて導入し、 FreeStyle™ 293 Expression Mediumで培養した。培養スケールは30mLで実施し、96時間後に培養上清を回収後、ルシフェラーゼアッセイによって発光強度を測定した。

Expi293™、Freestyle™、 Expi293F™は、Thermo Fisher Scientific社の登録商標です。

使用法 30 mL培養スケール

①		トランスフェクションの前に、125mLもしくは250mLのErlenmeyer shake flaskを用いて、トランスフェクションに必要な細胞数の培養細胞を準備する。 備考：培養開始時の生細胞密度の目安は＞0.8x106 /mLです。
②		【細胞懸濁液の調製】 トランスフェクション実験の直前に、125mL Erlenmeyer shake flaskを用いて、28mLの細胞懸濁液を用意する。その際、培地中の細胞数が下記になるように培地で調製する。 ●Expi293F™ Cellsの場合 　生細胞数2.7x106/mL (生細胞数7.5x107/28mL) ●FreeStyle™ 293-F Cellsの場合 　生細胞数1.1x106/mL (生細胞数3.0x107/28mL) 備考：生細胞率が90%未満にならないように調製してください。
③		使用前にボルテックスミキサーでScreenFect™UP-293 Transfection Reagentをよく混合する。
④		【希釈済みトランスフェクション試薬の調製】 ●Expi293F™ Cellsの場合 60µLのScreenFect™UP-293 Transfection Reagentを940µLのScreenFect™UP-293 Dilution Bufferに添加し、ピペッティングで混合する。 ●FreeStyle™ 293-F Cellsの場合 30µLのScreenFect™UP-293 Transfection Reagentを970µLのOpti-MEM™ I Reduced Serum Mediumに添加し、ピペッティングで混合する。
⑤		【希釈済みDNA溶液の調製】 ●Expi293F™ Cellsの場合 30µgのplasmid DNA(1µg/µL)を970 µLのScreenFect™UP-293 Dilution Bufferに添加し、ピペッティングで混合する。 ●FreeStyle™ 293-F Cellsの場合 30µgのplasmid DNA(1µg/µL)を970µLのOpti-MEM™ I Reduced Serum Mediumに添加し、ピペッティングで混合する。
⑥		【リポプレックス溶液の調製】 作製した希釈済みトランスフェクション試薬と希釈済みDNA溶液をピペッティングで混合し、スピンダウンする。室温で 5-20分間静置する。
⑦		リポプレックス溶液を細胞懸濁液に添加し、ゆっくりと攪拌しながら混合する。 備考：この時点でフラスコ内の液量は約30mLです。
⑧		オービタルシェーカーを用いて、37℃（8% CO2）、125rpmで16時間培養する。
⑨		150µLのScreenFect™UP-293 Boosterをフラスコへ添加する。
⑩		オービタルシェーカーを用いて、37℃（8% CO2）、125rpmで培養する。 目的のタンパク質を含む細胞または培養上清をトランスフェクションから48～120時間後に回収する。 備考:最適な培養時間は目的のタンパク質や細胞生存率などにより異なります。

Expi293™、Freestyle™、 Expi293F™は、Thermo Fisher Scientific社の登録商標です。

ScreenFect™UP-293 製品情報

コードNo.	品名	容量	Transfection Reagent	Dilution Buffer＊	Booster	希望納入価格（円）
294-80201	ScreenFect™UP-293	100mL用	200µL	6.7mL	500µL	7,500
290-80203		1L用	2x1mL	67mL	5mL	63,000

＊FreeStyle™ 293 Expression Systemに使用される場合、ScreenFect™UP-293 Dilution Bufferは使用しません。

別途必要な試薬

発現システム	Expi293™ Expression System	FreeStyle™ 293 Expression System
細胞	Expi293F™ Cells	FreeStyle™ 293-F Cells
培地	Expi293F™ Expression Medium	FreeStyle™ 293 Expression Medium
希釈バッファー	不要＊	Opti-MEM™ I Reduced Serum Medium

＊ScreenFect™UP-293 Dilution Bufferで希釈します。

• ∙∙∙ 2〜10℃保存
• ∙∙∙ -20℃保存
• ∙∙∙ -80℃保存
• 表示がない場合は室温保存です。
• ∙∙∙ 特定毒物
• ∙∙∙ 毒物
• ∙∙∙ 劇物
• ∙∙∙ 化審法 第一種特定化学物質
• ∙∙∙ 化審法 第二種特定化学物質
• ∙∙∙ 毒薬
• ∙∙∙ 劇薬
• ∙∙∙ 化学兵器禁止法 第一種指定物質
• ∙∙∙ 化学兵器禁止法 第二種指定物質
• ∙∙∙ 向精神薬
• ∙∙∙ 特定麻薬向精神薬原料
• ∙∙∙ カルタヘナ

※掲載内容は、2018年9月時点での情報です。

掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
表示している希望納入価格は「本体価格のみ」で消費税等は含まれておりません。
表示している希望納入価格は本記事掲載時点の価格です。

ScreenFect™ References

1. Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549.
2. Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014).
3. Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor."
4. Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3)
5. Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2)
6. Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600.
7. Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811.
8. Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814.